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Expression chez la levure
Les systèmes d'expression de levure comme Pichia pastoris sont des outils privilégiés pour une expression élevée de protéines sécrétées correctement repliées et une production limitée de protéines sécrétées endogènes.
Il s'agit d'un système d'expression eucaryote économique qui permet à la fois l'expression par sécrétion et l'expression intracellulaire. Des modifications post-traductionnelles ont été documentées, notamment la glycosylation, la phosphorylation et l'acylation, qui sont essentielles aux activités biologiques. Elle est particulièrement adaptée à l'expression et à la préparation de protéines fonctionnelles eucaryotes telles que la défensine, l'interleukine et les cytokines. La sécrétion souvent efficace de protéines correctement repliées dans le milieu extracellulaire est souvent observée et permet la production de protéines fonctionnelles de grande pureté.
Description du service
La production de protéine recombinante comprend plusieurs étapes allant du gène à la protéine purifiée, comme décrit dans le tableau ci-dessous.
Le délai de production est d'environ 9 à 12 semaines.
| Description | Resulting Material | Average turnaround (*) |
| Gene synthesis | ||
| -Codon optimization -Gene synthesis -Cloning in standard pUC plasmid -Complete sequencing |
Cloned, synthesized and verified gene | 2 weeks |
| Subcloning for expression | ||
| -Plasmid prep -Subcloning -Clone selection -Complete sequencing -Transformation of Pichia pastoris -Screening and strain creation. |
Strain with target gene | 3-4 weeks |
| Pilot expression | ||
| -Expression pilot and optimization experiments -Choice of most suitable strain -Adjust culture conditions -Determine yields and protein behavior |
10-50 µg of semi-purified protein | 2-3 weeks |
| Expression and purification | ||
| -Expression -Protein extraction -Protein purification -SDS-PAGE, WESTERN blot |
Purified protein | 2-3 weeks |
(*) Average production time for average difficult project. Actual turn around time varies with individual project features.