Les systèmes d’expression chez la levure comme Pichia pastoris sont des outils privilégiés pour l’expression élevée de protéines sécrétoires correctement repliées et la production limitée de protéines sécrétoires endogènes.
Il s’agit d’un système d’expression eucaryote rentable qui permet à la fois l’expression par sécrétion et l’expression intracellulaire. Des modifications post-traductionnelles ont été documentées, notamment la glycosylation, la phosphorylation et l’acylation, qui sont essentielles pour les activités biologiques. Elle est particulièrement adaptée à l’expression et à la préparation de protéines fonctionnelles eucaryotes telles que la défensine, l’interleukine et les cytokines. La sécrétion souvent efficace de protéines correctement repliées dans le milieu extracellulaire est souvent observée et permet la production de protéines fonctionnelles de grande pureté.
Tous les services comprennent plusieurs étapes, du gène à la protéine purifiée, comme décrit dans le tableau ci-dessous.
Le délai d’exécution est d’environ 9 à 12 semaines.
Description | Matériel résultant | Délai d'exécution moyen (*) |
Synthèse de gène | ||
- Optimisation des codons - Synthèse du gène - Clonage dans le plasmide standard pUC - Séquençage complet |
Gène cloné, synthétisé et vérifié | 2 semaines |
Sous-clonage pour l'expression | ||
- Préparation des plasmides - Sous-clonage - Sélection du clone - Séquençage complet |
Vecteur plasmidique avec gène cible cloné | .2 semaines |
Expression du pilote | ||
- Expériences pilotes d'expression et d'optimisation - Choix de l'hôte le plus approprié - Ajustement des conditions de culture - Détermination des rendements et du comportement des protéines |
10-50 µg de protéine semi-purifiée | 2-3 semaines |
Expression et purification | ||
- Expression - Extraction de la protéine - Purification de la protéine - SDS-PAGE, WESTERN blot |
Protéine purifiée | 2-3 semaines |
(*) Temps de production moyen pour un projet moyennement difficile. Le délai d'exécution réel varie en fonction des caractéristiques du projet..