Expression chez E. coli

 

L’expression de protéines chez E. coli est le plus économique et le plus couramment utilisé.  Il est particulièrement adapté à la préparation d'antigènes, de ligands, de cytokines ou de protéines bactériennes.  La relative simplicité du système et la connaissance de la génétique des hôtes en ont fait un système de choix.  Par ailleurs, E. coli a courte période de culture et offre la possibilité d’obtenir des rendements élevés.
Au cours des dernières décennies, le système d'expression E. coli a été développé et est bien documenté par son  utilisation intensive en recherche et dans l'industrie pour un grand nombre d'expression de protéines recombinantes.

 

 

Description du service

La production de protéine recombinante comprend plusieurs étapes allant du gène à la protéine purifiée, comme décrit dans le tableau ci-dessous.

Le délai de production est d'environ 8 à 10 semaines.

 

 

 

 

Description Resulting Material Average turnaround (*)
Gene synthesis
-Codon optimization
-Gene synthesis
-Cloning in standard pUC plasmid
-Complete sequencing
Cloned, synthesized and verified gene 2 weeks
Subcloning for expression
-Plasmid prep
-Subcloning
-Clone selection
-Complete sequencing
Plasmid vector with cloned target gene 2 weeks
Pilot expression
-Expression pilot and optimization experiments
-Choice of most suitable host
-Adjust culture conditions
-Determine yields and protein behavior
10-50 µg of semi-purified protein 2-3 weeks
Expression and purification
-Expression
-Protein extraction
-Protein purification
-SDS-PAGE, WESTERN blot
Purified protein 2-3 weeks

(*) Average production time for average difficult project. Actual turn around time varies with individual project features.

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