La expresión de proteínas en E. coli es el método más económico y comúnmente utilizado. Es especialmente adecuado para la preparación de antígenos, ligandos, citoquinas o proteínas bacterianas. La relativa sencillez del sistema y el conocimiento de la genética del huésped lo han convertido en el sistema preferido. Además, E. coli tiene un periodo de cultivo corto y ofrece la posibilidad de obtener altos rendimientos.
A lo largo de las últimas décadas, el sistema de expresión de E. coli se ha desarrollado y documentado gracias a su amplio uso en la investigación y por parte de los usuarios industriales para una amplia gama de expresión de proteínas recombinantes.
La producción de proteínas recombinantes implica varios pasos desde el gen hasta la proteína purificada, como se describe en la tabla siguiente.
El tiempo de producción es de aproximadamente 8 a 10 semanas.
Description | Resulting Material | Average turnaround (*) |
Gene synthesis | ||
-Codon optimization -Gene synthesis -Cloning in standard pUC plasmid -Complete sequencing |
Cloned, synthesized and verified gene | 2 weeks |
Subcloning for expression | ||
-Plasmid prep -Subcloning -Clone selection -Complete sequencing |
Plasmid vector with cloned target gene | 2 weeks |
Pilot expression | ||
-Expression pilot and optimization experiments -Choice of most suitable host -Adjust culture conditions -Determine yields and protein behavior |
10-50 µg of semi-purified protein | 2-3 weeks |
Expression and purification | ||
-Expression -Protein extraction -Protein purification -SDS-PAGE, WESTERN blot |
Purified protein | 2-3 weeks |
(*) Average production time for average difficult project. Actual turn around time varies with individual project features.