Expresión de proteínas

Ofertas de servicios

El equipo de producción de proteínas de Genosphere Biotechnologies ofrece amplios servicios para los procesos de expresión, producción y purificación de proteínas.

Díganos qué proteína le interesa para su investigación y la produciremos para usted según sus especificaciones.

Nuestras proteínas recombinantes se han utilizado con éxito en una amplia gama de experimentos, incluyendo el desarrollo de anticuerpos, ensayos de actividad, cristalografía, interacciones proteína-proteína, interacciones proteína-ADN.

Proteínas garantizadas, asequibles y listas para usar en pocas semanas

Pureza >80% o Pureza >90%

De los datos del ADN a la proteína purificada

Flujo de trabajo estándar del proyecto

1• Diseño de la secuencia

Varios estudios han revelado que el sesgo en el uso de codones puede causar graves problemas de expresión. La presencia de codones poco utilizados por la maquinaria de traducción del hospedador suele provocar:

• Reducción de la tasa de traducción del ARNm diana.

• Incorporación incorrecta de aminoácidos.

• Polipéptidos o proteínas truncados o con aminoácidos suprimidos.

• Proteínas de marco desplazado.

El resultado global es una producción de proteínas baja o indetectable.

Para ayudar a resolver los problemas relacionados con el sesgo en el uso de codones, la secuencia de ADN diana puede redefinirse mediante cambios de codones utilizando la tabla de frecuencias de uso adecuada para el organismo huésped: eso es la optimización de codones. Se ha comprobado que este enfoque general mejora significativamente la expresión de proteínas heterólogas en numerosos casos.

El proceso de diseño del proyecto incluye la adición de TAGS de terminación N-/C- para fines de purificación y detección.

2• Síntesis y caracterización de genes

• El ADN se sintetiza a partir de oligonucleótidos.
• Se construye el ORF sintético y se clona en nuestro plásmido estándar pUC de alto número de copias.
• Se examinan las colonias transformadas, se selecciona un primer grupo de cinco clones positivos, se amplifican y se purifican.
• Se confirma la secuencia de ADN.

3• Subclonación en un vector de expresión

• Preparación del plásmido, digestión de restricción y purificación en gel del fragmento objetivo, ligación del fragmento en el vector o vectores más adecuados para su huésped.
• Transformación de células, crecimiento de cultivos bajo presión selectiva, DNA mini prep.
• Confirmación de la secuencia de ADN.
• Preparación Midi/Maxi del plásmido para el vector clonado confirmado.

4• Ensayo de expresión de proteínas y optimización

• Transfección a pequeña escala y matraces reactores para determinar el nivel de expresión del gen.
• Análisis SDS-PAGE de los productos de expresión en diversas condiciones probadas.
• Expresión a escala.

5• Purificación y caracterización de proteínas a gran escala

• Columna estándar de cromatografía de afinidad basada en TAG seguida de cromatografía de intercambio iónico y/o filtración en gel.
• Experimento de refolding cuando sea necesario.
• Determinación de la concentración.
• Experimentos de SDS-PAGE y WESTERN BLOT.

Servicios opcionales disponibles:

Eliminación de TAG
Eliminación de endotoxinas
Fermentación y purificación a escala

Por dónde empezar

Puede ponerse en contacto con nosotros por correo electrónico a: protein@genosphere-biotech.com

Por favor, incluya la siguiente información

• La secuencia de su gen o proteína o el número de acceso UniProt

• Su(s) sistema(s) de expresión preferido(s)

• La cantidad en mg de proteína recombinante que necesita

• El nivel de purificación requerido >80% o >90

Cinco sistemas de expresión

• Expresión en bacterias Escherichia coli
• Expresión en levadura Pichia pastoris
• Expresión en células de insecto infectadas por baculovirus
• Expresión en células HEK o CHO
• Expresión in vitro (maquinaria enzimática de transcripción y traducción de E. coli)

Niveles estándar de pureza de proteínas

Elección de los niveles de purificación requeridos:
Pureza >80 % o Pureza >90%

Etiquetas de purificación por afinidad

N- o C-terminal
Fusión de glutatión S-transferasa (etiqueta GST)
6x o 10x residuos de histidina ((His)6 o (His10)tag)
etc.