CUSTOM SERVICES
FOR RESEARCH
FOR RESEARCH
Menu
Kundendienst
für Forschung
Serviceangebot
Das Proteinproduktionsteam von Genosphere Biotechnologies bietet umfassende Dienstleistungen für die Proteinexpression, -produktion und -reinigung.
Teilen Sie uns mit, welches Protein für Ihre Forschung von Interesse ist, und wir werden es für Sie nach Ihren Vorgaben herstellen.
Unsere rekombinanten Proteine wurden erfolgreich in einer Vielzahl von Experimenten eingesetzt, z. B. bei der Entwicklung von Antikörpern, Aktivitätsassays, Kristallographie, Protein-Protein-Interaktionen und Protein-DNA-Interaktionen.
Garantierte, kostengünstige, gebrauchsfertige Proteine in wenigen Wochen
Reinheit >80% oder Reinheit >90%
Von DNA-Daten zum gereinigten Protein
Standard-Projektablauf
1• Sequenz-Design
Eine Reihe von Studien hat gezeigt, dass die Verzerrung der Codon-Nutzung zu schwerwiegenden Expressionsproblemen führen kann. Das Vorhandensein von selten verwendeten Codons für die Wirts-Translationsmaschinerie führt häufig zu :
• Reduzierte Translationsrate der Ziel-mRNA.
• Fehlinkorporation von Aminosäuren.
• Abgeschnittene oder aminosäurefreie Polypeptide oder Proteine.
• Rahmenverschobene Proteine.
Das Gesamtergebnis ist eine geringe oder nicht nachweisbare Proteinproduktion.
To help solve the issues related to codon usage bias, the target DNA sequence may be re-defined through codon changes using the appropriate usage frequency table for the host organism: that’s codon optimisation. This general approach has been verified to significantly improve heterologous protein expression in numerous cases.
Project design process includes adding N-/C- terminus TAGS for purification and detection purposes.
2• Gensynthese und Charakterisierung
• Die DNA wird ausgehend von Oligonukleotiden synthetisiert.
• Der synthetische ORF wird erstellt und in unser Standardplasmid pUC mit hoher Kopienzahl kloniert.
• Die transformierten Kolonien werden gescreent, ein erster Satz von fünf positiven Klonen wird ausgewählt, amplifiziert und gereinigt.
• Die DNA-Sequenz wird bestätigt.
3• Subklonierung in einen Expressionsvektor
• Plasmidvorbereitung, Restriktionsverdau und Gelreinigung des Zielfragments, Ligation des Fragments in den/die am besten geeigneten Vektor(en) für Ihren Wirt.
• Transformation von Zellen, Picken, Wachsen unter selektivem Druck, DNA-Mini-Prep.
• Bestätigung der DNA-Sequenz.
• Plasmid Midi/Maxi Prep für den bestätigten klonierten Vektor.
4• Proteinexpressionstest und Optimierung
• Transfektion im kleinen Maßstab und Reaktorflaschen zur Bestimmung der Genexpression.
• SDS-PAGE-Analyse der Expressionsprodukte unter verschiedenen Testbedingungen.
• Scale-up expression.
5• Scale-up der Proteinreinigung und -charakterisierung
• Standard-Affinitätschromatographiesäule auf TAG-Basis, gefolgt von Ionenaustausch- und/oder Gelfiltrationschromatographie.
• Erforderlichenfalls Rückfaltungsversuch.
• Konzentrationsbestimmung.
• SDS-PAGE und WESTERN BLOT Experimente.
Optionale Dienste verfügbar
• TAG-Entfernung
• Endotoxin-Eliminierung
• Scale-up der Fermentation und Reinigung
Wo soll man anfangen?
Sie können uns per E-Mail kontaktieren: protein@genosphere-biotech.com
Bitte geben Sie die folgenden Informationen an:
• Ihre Gen- oder Proteinsequenz oder UniProt-Hinterlegungsnummer• Ihr(e) bevorzugte(s) Expressionssystem(e)
• Die benötigte mg-Menge an rekombinantem Protein
• Der erforderliche Reinigungsgrad: >80% or >90%
• Fünf Expressionssysteme
• Expression in Bakterien Escherichia Coli
• Expression in Hefe Pichia pastoris
• Expression in Baculovirus-infizierten Insektenzellen
• Expression in HEK- oder CHO-Zellen
• Expression in vitro (enzymatische Transkriptions- und Translationsmaschinerie von E. Coli)
• Standard-Proteinreinheitsgrade
Auswahl der erforderlichen Reinheitsgrade:
• Reinheit >80 %
oder
• Reinheit > 90 %
• Affinitäts-Reinigungs-Tags
• N- oder C-terminal
• Glutathion-S-Transferase-
• Fusion (GST-Tag)
6x oder 10x Histidinreste ((His)6 oder (His10)Tag)
usw…