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Expresión de proteínas en levadura
Los sistemas de expresión de levadura como Pichia pastoris son las herramientas preferidas para una alta expresión de proteínas secretadas plegadas correctamente y una producción limitada de proteínas endógenas secretadas. Es un sistema de expresión eucariota rentable que permite la expresión secretora e intracelular. Se han documentado modificaciones postraduccionales, que incluyen glicosilación, fosforilación y acilación, que son esenciales para las actividades biológicas. Es particularmente adecuado para la expresión y preparación de proteínas funcionales eucariotas como defensina, interleucina y citocinas. La secreción a menudo eficiente de proteínas correctamente plegadas en el medio extracelular se observa a menudo y permite la producción de proteínas funcionales de alta pureza.
Descripción del servicio
La producción de proteínas recombinantes implica varios pasos desde el gen hasta la proteína purificada, como se describe en la tabla siguiente.
El tiempo de producción es de aproximadamente 9 a 12 semanas.
| Description | Resulting Material | Average turnaround (*) |
| Gene synthesis | ||
| -Codon optimization -Gene synthesis -Cloning in standard pUC plasmid -Complete sequencing |
Cloned, synthesized and verified gene | 2 weeks |
| Subcloning for expression | ||
| -Plasmid prep -Subcloning -Clone selection -Complete sequencing -Transformation of Pichia pastoris -Screening and strain creation. |
Strain with target gene | 3-4 weeks |
| Pilot expression | ||
| -Expression pilot and optimization experiments -Choice of most suitable strain -Adjust culture conditions -Determine yields and protein behavior |
10-50 µg of semi-purified protein | 2-3 weeks |
| Expression and purification | ||
| -Expression -Protein extraction -Protein purification -SDS-PAGE, WESTERN blot |
Purified protein | 2-3 weeks |
(*) Average production time for average difficult project. Actual turn around time varies with individual project features.