Especificaciones de las muestras

Especificaciones de las muestras

Secuenciación por degradación de Edman

Cantidad de muestra

Necesitamos por lo menos 20 pmoles de proteína transferida. Pero para obtener resultados sin ambigüidad, 50 pmoles son preferibles.

Protein size µg for 20 pmoles
10 kDa 0.2
25 kDa 0.5
50 kDa 1.0
75 kDa 1.5
100 kDa 2.0
125 kDa 2.5

Forma de las muestras

Aceptamos las muestras transferidas a membrana PVDF o las proteínas purificadas liofilizadas o en solución.

Transferida a membrana PVDF (preferentemente)

La proteína debe ser electrotransferida a partir de gel 1D o 2D y teñida con azul coomasia (R250). Después de teñir y desteñir, es indispensable realizar un buen lavado con agua desionizada. Las bandas deben estar concentradas al máximo (15 a 20 pmoles/pozo) y pueden proporcionarnos varias bandas. También pueden proporcionarnos la membrana entera con una fotocopia que indique la banda que les interesa y su peso molecular.

Proteína liofilizada o en solución

30 a 150 µl de solución (H2O, Acetonitrilo, Propanol) o proteína pura liofilizada.
La proteína no debe contener detergentes, sales o tampones. También tenga en cuenta que todo contaminante que contenga un grupo amino (e.g. Tris) pertubará la etapa de derivatización.
Todas las muestras en solución son objeto de una purificación previa suplementaria que será facturada.

Pureza de las muestras

Membranas PVDF: La/las bandas de interés deben estar correctamente separadas.
En solución: Proteína única purificada. Tenga en cuenta que las muestras obtenidas por inmuno-precipitación o purificadas por afinidad dan generalmente buenos resultados.
Todas las muestras en solución son objeto de una purificación previa suplementaria que será facturada.

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