Anticuerpos antipéptido

<strong>Figura 1. </strong>Se sintetizaron, se purificaron y se conjugaron a KLH tres péptidos de 15 aa. Fueron utilizados separadamente para producir anticuerpos policlonales en conejos. Las secuencias diferían las unas de las otras por 8 aa. Se realizaron análisis ELISA cruzados, con dilución 1:10000. Los resultados enseñan una discriminación total de los antisueros producidos.<br/>
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Si no se dispone de la proteína para la inmunización, se puede diseñar de su secuencia péptidos de 10 a 25 aa capaces de ser utilizados como haptenos para generar anticuerpos. 
Genosphere Biotechnologies propone la producción de anticuerpos policlonales a tarifas competitivas. Indiquenos la secuencia de su péptido y la especie escogida y le entregaremos antisueros, con título elevado, dentro de 14 semanas. Podemos ayudarle en la búsqueda y la elección de la secuencia de su péptido. Genosphere Biotechnologies produce, desde muchos años, toda clase de péptidos y de péptidos conjugados (a KLH, BSA, OVA…), de calidad controlada, para la inmunización (pureza 70-90%). 
Aunque numerosos otros factores influyan la calidad final de los anticuerpos, la calidad del péptido sintético es uno de los puntos críticos en la obtención de anticuerpos específicos.

Oferta estándar: conejos o cobayas 

La oferta estándar de producción de anticuerpos antipéptido comprende:

  • La síntesis, la purificación y la conjugación a KLH de su péptido
  • La inmunización de 2 animales y el suministro:

    • de 100 ml de antisuero de conejos titulado por ELISA
    • o de 20 ml de antisuero de cobayas titulado por ELISA
    • del suero preinmune de control
    • del informe que incluye los datos ELISA
    • de 5 a 10 mg de péptido sin conjugar, pureza 70 a 90% (con datos HPLC & SM )

De otro modo, podemos seguir su propio procedimiento o diseñar protocolos específicos, acordes con su necesitad, que incluyen, por ejemplo, sangrías a periodos diferentes, un mayor número de animales, o varias especies simultáneamente. Es posible prolongar todos los proyectos más tiempo que el previsto al principio para recoger antisuero adicional.

<strong>Figura 2.</strong> Se somete cada proyecto de anticuerpos a un control de calidad riguroso que comprende el análisis ELISA del antisuero y del suero preinmune, el perfil HPLC y el espectro de masas del péptido.<br/>
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Conjugación del péptido a una proteína portadora

Péptidos sintéticos son de tamaño demasiado pequeño para inducir una buena repuesta inmune durante la producción de anticuerpos en animales. Por eso, se utilizan rara vez así como antígenos. Generalmente se asocian covalentemente a una proteína de alto peso molecular antes de ser utilizados como inmunógenos. El éxito de la inmunización y la producción de antisuero de título elevado, con repuesta específica, necesitan un gran razón molar entre el péptido y la proteína portadora y una buena orientación de todos los epítopos peptídicos. Por eso, la calidad del péptido y el control de la conjugación son criterios de mayor importancia en el éxito del proyecto de inmunización.

Las condiciones de conjugación utilizadas en nuestra oferta estándar son las siguientes:

  • Proteína portadora: KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin). Es una molécula aislada de un molusco, seleccionada por su alto peso molecular y su inmunogenicidad importante frente a los sistemas inmunitarios de los mamíferos y de los aves. Además, tiene muchos grupos amino libres que permiten la conjugación al hapteno.
  • Conjugación: via una cisteína terminal (N- o -C) del péptido mediante la química sulfidril y los grupos amino de la KLH. Esta estrategia que recurre a dos químicas diferentes, en dos etapas, con aislamiento de los productos intermediarios, permite impuestar y controlar la orientación del péptido sobre la proteína KLH globular.

Por regla general, el péptido debe comprender por lo menos 10 aminoácidos y incorporar una cisteína terminal (en el extremo N- o -C) para la conjugación. 

No obstante si sus proyectos necesitan la utilización de secuencias cortas (5 a 10 aa) hemos desarrollado un protocolo especial y eficaz. También es posible conjugar la proteína portadora directamente al grupo amino del extremo N-. No dude en contactarnos, con los detalles de sus proyectos, para obtener más informaciones.

<strong>Figura 3.</strong> Representación gráfica de los resultados obtenidos por algoritmos. Las zonas oscuras indican los péptidos dentro de la secuencia de la proteína que cumplen los criterios de antigenicidad.<br/>
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Péptidos multiantígenicos (MAP)

En algunos casos se puede emplear péptidos multiantígenicos (MAP) en lugar de péptidos conjugados a una proteína portadora. Estos MAP contienen 8 o 16 copias de un mismo péptido sintetizado directamente, mediante una resina especial, sobre un núcleo ramificado de lisina. La macromolécula obtenida (10-15 kDa) tiene un percentaje elevado de péptido antígeno y no necesita conjugación a una molécula portadora. Gracias por notar que no se puede utilizar MAP si la secuencia del péptido proviene del extremo-C de la proteína diana.

Control calidad

Se controla la calidad de los péptidos sínteticos por HPLC y espectro de masas. Se siguen las repuestas inmunitarias durante todo el protocolo que puede adaptarse si hace falta. Para cada proyecto, se analizan el antisuero y el suero preinmune de cada animal por ELISA. Garantizamos, como mínimo, un buen título de sus anticuerpos. Los datos ELISA son comunicados en un informe entregado para cada proyecto que indica los procedimientos y los reactivos a fin de permitirle que reproduzca los análisis.

Búsqueda de péptidos antígenos

Si no se dispone de la proteína para la inmunización, se puede diseñar, a partir de su secuencia, péptidos de 15 a 20 aa capaces de ser utilizados como haptenos para generar anticuerpos. El diseño se basa en el análisis de la antigenicidad, de la hidrofilicidad, de las estruturas secundarias, de la accesibilidad y por fin en la factibilidad de la síntesis. Uno o varios de los péptidos diseñados se sintetizan y se emplean como epítopos separadamente o simultáneamente para la inmunización. Los anticuerpos generados están así capaces de reconocer a la o las secuencias dentro de la proteína de la que se las dedujo. Mediante algoritmos adecuados, podemos analizar su proteína y someter a su elección varios péptidos posibles para sus proyectos de anticuerpos.

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