Technische Hinweise - kundenspezifische Peptide

Lagerung und Handhabung von Peptiden

Lyophilisierte Peptide (empfohlen): Für maximale Stabilität sollten Peptide lyophilisiert bei -20 °C gelagert werden. Lassen Sie gekühlte Peptide vor dem Öffnen des Röhrchens 30 min in einem Exsikkator auf Raumtemperatur kommen. Viele Peptide sind hygroskopisch und können beim Öffnen Feuchtigkeit aus der Luft aufnehmen.
Gelöste Peptide: Peptide in Lösung sind deutlich weniger stabil als lyophilisierte Peptide. Für eine optimierte Stabilität und Lagerung gelöster Peptide empfehlen wir:

• Bei -20 °C in einer sterilen, leicht sauren, gepufferten Lösung (pH 5-7) lagern.
• Stammlösung aliquotieren und wiederholte Einfrier-Auftau-Zyklen vermeiden.

Lösen von Peptiden

Die Löslichkeit von Peptiden in wässrigen Lösungen hängt stark von Primär- und Sekundärstruktur ab. Viele Modifikationen können die Löslichkeit ebenfalls beeinflussen. C-Amid- und N-Acetyl-Enden verringern beispielsweise die Löslichkeit einer Sequenz deutlich. Für Reinigungszwecke lösen sich die meisten Peptide in polaren Lösungsmitteln (Acetonitril, Methanol, Propanol, DMF, DMSO), die auch die Retentionszeiten in der RP-LC beeinflussen können.
Die folgenden experimentellen Ansätze helfen bei der Rekonstitution Ihrer Peptide.
Verwenden Sie zum Lösen von Peptiden immer steriles Wasser, da die meisten Bakterien Peptide sehr effizient hydrolysieren. Im Allgemeinen empfiehlt es sich, das Peptid zunächst in Wasser zu lösen und anschließend mit gepufferter oder salzhaltiger Arbeitslösung zu verdünnen. Für Peptide mit unbekannter Löslichkeit wird ein erster Ansatz von 1 bis 10 mg/ml empfohlen.
Bei schwer löslichen Peptiden können die folgenden Grundregeln helfen, mit oder ohne kurze Sonikation.

• Basisches Peptid (Lys, Arg…): 1 bis 10 % Essigsäure versuchen.
• Saures Peptid (Glu, Asp…): 1 % Ammoniumhydroxid oder 1 bis 10 % Ammoniumbicarbonat versuchen.
• Bei Aggregation und/oder hydrophoben Peptiden (aliphatische Ketten oder aromatische Aminosäuren) können polare organische Lösungsmittel helfen, hydrophobe intermolekulare Wechselwirkungen aufzubrechen. Mehrere Lösungsmittel sind möglich; wir empfehlen DMSO/Wasser oder DMF/Wasser. Nach vollständiger Solubilisierung kann das Peptid mit sterilem Wasser oder gepufferten wässrigen Lösungen auf die Arbeitskonzentration verdünnt werden.

Cystein, Methionin und Tryptophan sind oxidationsanfällig und sollten in sauerstofffreiem Wasser gelöst und gelagert werden, das vor der Lösung durch Einleiten von Stickstoff, Helium oder Argon vorbereitet wurde.
KLH-Konjugate können schwer löslich sein; eine vollständige Hydratation kann lange dauern und dennoch eine trübe Lösung ergeben.

Sequenzdesign

Nachfolgend sind einige empirische Regeln aufgeführt, die die Herstellung Ihrer Produkte unter optimalen Bedingungen erleichtern sollen. Diese Regeln leiten sich von den grundlegenden Eigenschaften der Monomere.

• Peptidlänge

Im Allgemeinen sinkt die Ausbeute einer Peptidsynthese mit zunehmender Länge. Die meisten Peptide unter 50 aa können mit zufriedenstellenden Ausbeuten erhalten werden.

• Hydrophobe Reste

Weniger als 50 % aller aa und weniger als 4-5 hintereinander. Während der Elongation kann es zwischen Peptidketten zur Bildung von Beta-Strängen kommen, wenn lange Abschnitte hydrophober Reste vorhanden sind. Dies führt häufig zu geringen Ausbeuten.

• Reaktive Aminosäuren

Mehrere Cys-, Met- und Trp-Reste sollten vermieden werden.

Die folgende Abbildung zeigt, dass eine kleine lokale Änderung der Peptidstruktur, z. B. eine interne Aminosäure, die Hydrophobizität des gesamten Moleküls deutlich beeinflussen kann.