Proteinsequenzierung

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N-terminale Proteinsequenzierung durch Edman-Abbau

Die Proteinsequenzierung durch Edman-Abbau besteht aus 3 sich wiederholenden Schritten (i) die chemische Modifizierung der freien Aminogruppe an der N-terminalen Aminosäure des Proteins durch Phenylisothiocyanat (PITC), (ii) die Ablösung der derivatisierten N-terminalen AS und (iii) die Analyse der abgelösten derivatisierten AS durch RP-HPLC Analyse und Detektion bei UV = 270 nm. Die verschiedenen derivatisierten Aminosäuren unterscheiden sich durch ihre Retentionszeiten in der RP-HPLC. Ein Vergleich des erhaltenen Elutionsprofils der derivatisierten AS mit einem Kalibrierstandard, der aus einem Satz derivatisierter AS besteht, erlaubt es die jeweilige AS zu identifizieren und zu benennen. (Abb.1).

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