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Proteinexpression in Hefe
Hefe-Expressionssysteme wie Pichia pastoris sind bevorzugte Werkzeuge für eine hohe Expression korrekt gefalteter sezernierter Proteine und eine begrenzte Produktion von endogen sezernierten Proteinen. Es ist ein kostengünstiges eukaryotisches Expressionssystem, das sowohl die sekretorische als auch die intrazelluläre Expression ermöglicht. Posttranslationale Modifikationen wurden dokumentiert, einschließlich Glykosylierung, Phosphorylierung und Acylierung, die für biologische Aktivitäten essentiell sind. Es eignet sich besonders zur Expression und Herstellung von eukaryotischen funktionellen Proteinen wie Defensin, Interleukin und Zytokinen. Die oft effiziente Sekretion von korrekt gefalteten Proteinen in das extrazelluläre Medium wird oft beobachtet und ermöglicht die Produktion von funktionellen Proteinen hoher Reinheit.
Beschreibung der Dienstleistung
Die Herstellung von rekombinantem Protein umfasst mehrere Schritte vom Gen bis zum gereinigten Protein, wie in der nachstehenden Tabelle beschrieben.
Die Produktionszeit beträgt etwa 9 bis 12 Wochen.
| Description | Resulting Material | Average turnaround (*) |
| Gene synthesis | ||
| -Codon optimization -Gene synthesis -Cloning in standard pUC plasmid -Complete sequencing |
Cloned, synthesized and verified gene | 2 weeks |
| Subcloning for expression | ||
| -Plasmid prep -Subcloning -Clone selection -Complete sequencing -Transformation of Pichia pastoris -Screening and strain creation. |
Strain with target gene | 3-4 weeks |
| Pilot expression | ||
| -Expression pilot and optimization experiments -Choice of most suitable strain -Adjust culture conditions -Determine yields and protein behavior |
10-50 µg of semi-purified protein | 2-3 weeks |
| Expression and purification | ||
| -Expression -Protein extraction -Protein purification -SDS-PAGE, WESTERN blot |
Purified protein | 2-3 weeks |
(*) Durchschnittliche Bearbeitungszeit und Herstellungsdauer. Die tatsächliche Lieferzeit kann in Abhängigkeit von z.B. DNA-Sequenz, Reinigungsschritten usw. davon abweichen. Wir informieren Sie per E-Mail zeitnah über den aktuellen Stand Ihres Projektes.