Baculovirus Expressionssystem

Baculovirus Expressionssystem

Das eukaryotische Baculovirus/Insektenzell System wird verwendet, um Proteine aus einem breiten Spektrum von verschiedenen Organismen, rekombinant zu produzieren. Im Gegensatz zu E.coli Expressionssystemen, besitzt dieses System eine „eukaryotische Zellmaschinerie“, die es ihr, beispielsweise, ermöglicht biologisch aktive Proteine mit der richtigen Faltung und funktionsfähigen Disulfidbrückenbindungen überzuexprimieren. Die Lokalisation der rekombinanten Proteine in der Zelle ist für gewöhnlich identisch mit der des nativen Proteins. Die meisten posttranslationalen Modifikationen , die für höhere Organismen kennzeichnend sind, werden durchgeführt, so zum Beispiel die N- and O-Glykosylierung, Phosphorylierung, Acetylierung und das Abtrennen von Signalpeptiden vom exprimierten Protein. Das Baculovirussystem hat sich als einer der erfolgreichsten Ansätze erwiesen, um biologisch aktive rekombinante Proteine im Milligramm Bereich herzustellen.

Expressionsservice Produktbeschreibung (Baculovirus / Sf9 )

Unser Baculovirus Proteinexpressions-Protokoll besteht, wie dies in der untenstehenden Tabelle zu sehen ist, aus mehreren hintereinander folgenden Arbeits- und Verifizierungsschritten von der Genherstellung bis zum gereinigten Protein. Für die Herstellung eines Proteins im Baculovirus / Sf9 Expressionssystem werden etwa 14 Wochen Zeit benötigt.

Arbeitsschritte (1-6) Zwischenprodukte Durchschnittliche
Bearbeitungszeit (*)
1. Gensynthese
-Codon Optimierung
-Gensynthese
-Klonierung in Standard pUC Plasmid
-Vollständige Sequenzierung
verifiziertes Gen
in pUC Plasmid
1-2 Wochen
2. Subklonierung in Baculovirus-Transfervektor
-Plasmidpräparation
-Subklonierung “Bac-Donor” -Vektor
-Klonauswahl
-Vollständige Sequenzierung
verifiziertes Gen
in „Bac-Donor“-Vektor
2 Wochen
3. Bacmid Herstellung
-Plasmidpräparation
-Rekombinante Bacmid Selektion
-Rekombinante Bacmid DNA Isolation
-Vollständige Sequenzierung
verifiziertes Gen
in Bacmid DNA
2 Wochen
4. Insektenzelltransfektion
-Mehrere Sf9 Transfektionen
-Virustiterbestimmung
-SDS-PAGE / Western Blot Analyse
hochtitriger rekombinanter
Baculovirus
3 Wochen
5. Expression im Pilotmaßstab
-Expression im Pilotmaßstab und Optimierung
der Kultivierungsbedingungen
-Bestimmung der Ausbeute und Proteineigenschaften
10-50 µg teilgereinigtes
Protein
1-2 weeks
6. Expression und Proteinreinigung
-Expression
-Proteinextraktion
-ProteinReinigung
-SDS-PAGE, WESTERN Blot
0.1 bis 3 mg gereinigtes
Protein
Reinheit >95%
2-3 Wochen

(*) Durchschnittliche Bearbeitungszeit und Herstellungsdauer. Die tatsächliche Lieferzeit kann in Abhängigkeit von z.B. DNA-Sequenz, Reinigungsschritten usw. davon abweichen. Wir informieren Sie per E-Mail zeitnah über den aktuellen Stand Ihres Projektes.

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