Hefe Expressionssystem

 

Hefe (Yeast) ist ein sehr wirtschaftliches eukaryotisches Expressionssystem

In Hefe sind beriets viele posttranslationale Modifikationen möglich, die für die Expression funktioneller Proteine notwendig sind.  Da die biologische Aktivität von Proteinen stark von der korrekten Faltung, spezifischen Glykosylierungen sowie anderen Modifikationen (Phosphorylierung, Acetylierung usw.) abhängt, kann das Hefe-Expressionssystem eine vorteilhafte Alternative zur bakteriellen Expression sein. 

Das Team von Genosphere Biotechnologies wird Ihr Protein entweder als sezerniertes heterologes Protein oder durch intrazelluläre Expression exprimieren.

 

 

Expressionservice Produktbeschreibung

 

Unser Hefe Proteinexpressions-Protokoll besteht, wie dies in der untenstehenden Tabelle zu sehen ist, aus mehreren hintereinander folgenden Arbeits- und Verifizierungsschritten, beginnend mit der Gensynthese bis hin zum gereinigten Protein.

Für die Herstellung eines Proteins im Hefe Expressionssystem werden etwa 10-12 Wochen Zeit benötigt.

 

 

Arbeitsschritte (1-4) Zwischenprodukte Durchschnittliche
Bearbeitungszeit (*)

1. Gensynthese

-Codon Optimierung
-Gensynthese
-Klonierung in Standard pUC Plasmid
-Vollständige Sequenzierung
verifiziertes Gen
in pUC Plasmid
1-2 Wochen

2. Subklonierung in Expressionsvektor

-Plasmidpräparation
-Subklonierung in Expressionsvektor
-Klonauswahl
-Vollständige Sequenzierung
verifiziertes Gen
in Expressionvektor
1-2 Wochen

3. Expression im Pilotmaßstab

-Expressionsvektorpräparation
-Transformation von 3 verschiedenen Ansätzen
-Proteininduktion und Optimierung der Bedingungen
- Bestimmung der Ausbeute und Proteineigenschaften
10-50 µg teilgereinigtes
Protein
1-2 Wochen

4. Expression und Proteinreinigung

-Expression in Bakterienkultur
-Proteinextraktion
-Proteinreinigung
-SDS-PAGE, WESTERN Blot
0.5-5 mg gereinigtes
Protein
2-3 Wochen

 

(*) Durchschnittliche Bearbeitungszeit und Herstellungsdauer. Die tatsächliche Lieferzeit kann in Abhängigkeit von z.B. DNA-Sequenz, Reinigungsschritten usw. davon abweichen. Wir informieren Sie per E-Mail zeitnah über den aktuellen Stand Ihres Projektes.

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