Säugerzellen Proteinexpressions

Säugerzellen eignen sich hervorragend zur Herstellung rekombinanter Zielproteinen, die eine korrekte Faltung, Assemblierung von Untereinheiten oder posttranslationale Modifikationen erfordern und sie werden häufig in der Biotechindustrie zur Produktion von bioaktiven Proteinen verwendet.


Abhängig von Bedürfnissen und Anforderungen können verschiedene Säugerzelle genutzt werden.

 

 

Expressionsservice Produktbeschreibung

Unser Proteinexpressions-Protokoll besteht, wie dies in der untenstehenden Tabelle zu sehen ist, aus mehreren hintereinander folgenden Arbeits- und Verifizierungsschritten von der Genherstellung bis zum gereinigten Protein.

Für die Herstellung eines Proteins werden etwa 10-14 Wochen Zeit benötigt.

Arbeitsschritte (1-6) Zwischenprodukte Durchschnittliche
Bearbeitungszeit (*)
1. Gensynthese
-Codon Optimierung
-Gensynthese
-Klonierung in Standard pUC Plasmid
-Vollständige Sequenzierung
verifiziertes Gen
in pUC Plasmid
1-2 Wochen
2. Subklonierung in Baculovirus-Transfervektor
-Plasmidpräparation
-Subklonierung “Bac-Donor” -Vektor
-Klonauswahl
-Vollständige Sequenzierung
verifiziertes Gen
in „Bac-Donor“-Vektor
2 Wochen
3. Bacmid Herstellung
-Plasmidpräparation
-Rekombinante Bacmid Selektion
-Rekombinante Bacmid DNA Isolation
-Vollständige Sequenzierung
verifiziertes Gen
in Bacmid DNA
2 Wochen
4. Insektenzelltransfektion
-Mehrere Transfektionen
-Virustiterbestimmung
-SDS-PAGE / Western Blot Analyse
hochtitriger rekombinanter
Baculovirus
3 Wochen
5. Expression im Pilotmaßstab
-Expression im Pilotmaßstab und Optimierung
der Kultivierungsbedingungen
-Bestimmung der Ausbeute und Proteineigenschaften
10-50 µg teilgereinigtes
Protein
1-2 weeks
6. Expression und Proteinreinigung
-Expression
-Proteinextraktion
-ProteinReinigung
-SDS-PAGE, WESTERN Blot
0.1 bis 1 mg gereinigtes
Protein
Reinheit >95%
2-3 Wochen

(*) Durchschnittliche Bearbeitungszeit und Herstellungsdauer. Die tatsächliche Lieferzeit kann in Abhängigkeit von z.B. DNA-Sequenz, Reinigungsschritten usw. davon abweichen. Wir informieren Sie per E-Mail zeitnah über den aktuellen Stand Ihres Projektes.

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