Baculovirus-Insekenzellen Expressionssystem

 

 

Das eukaryotische Baculovirus/Insektenzell Expressionssystem wird verwendet, um Proteine aus einem breiten Spektrum von verschiedenen Organismen, rekombinant zu produzieren. Im Gegensatz zu E.coli Expressionssystemen, besitzt dieses System eine „eukaryotische Zellmaschinerie“ (Golgi-Apparat, ER).die es, beispielsweise, ermöglicht biologisch aktive Proteine mit der richtigen Faltung und funktionsfähigen Disulfidbrückenbindungen überzuexprimieren.

Die Lokalisation der rekombinanten Proteine in der Zelle ist für gewöhnlich identisch mit der des nativen Proteins.

Die meisten posttranslationalen Modifikationen , die für höhere Organismen kennzeichnend sind, werden im Baculovirus/Insektenzell Expressionssystem durchgeführt, so zum Beispiel die N- and O-Glykosylierung, Phosphorylierung, Acetylierung und das Abtrennen von Signalpeptiden vom exprimierten Protein.

 

Expressionsservice Produktbeschreibung

Unser Proteinexpressions-Protokoll besteht, wie dies in der untenstehenden Tabelle zu sehen ist, aus mehreren hintereinander folgenden Arbeits- und Verifizierungsschritten von der Genherstellung bis zum gereinigten Protein.

Für die Herstellung eines Proteins werden etwa 10-14 Wochen Zeit benötigt.

Description Resulting Material Average turnaround (*)
Gene Synthesis Stage
-Codon optimization
-Gene synthesis
-Cloning in standard pUC plasmid
-Complete sequencing
Cloned, synthesized and verified gene 1-2 weeks
Subcloning in Baculovirus Transfer Vector Stage
-Plasmid prep
-Subcloning Bac-donor vector
-Clone selection
-Complete sequencing
Plasmid vector with cloned target gene 2 weeks
Bacmid Generation Stage
-Plasmid prep
-Recombinant bacmid selection
-Recombinant bacmid DNA isolation
-DNA Verification
Bacmid DNA with cloned target gene 2 weeks
Insect Cells Transfection Stage
-Multiple transfection experiments
-Virus titering
-SDS-PAGE / Western blot analysis
High titer recombinant baculovirus stock 3 weeks
Pilot Expression Stage
-Expression pilot and optimization experiments
-Determine yields and protein behavior
10-50 µg of semi-purified protein 1-2 weeks
Expression and Purification Stage
-Expression
-Protein extraction
-Protein purification
-SDS-PAGE, WESTERN blot
0.1 to 1 mg of purified protein
Purity >95%
2-3 weeks

 

 

(*) Average production time for average difficult project. Actual turn around time varies with individual project features.

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