E. coli Expressionssystem

Escherichia coli (E. coli) ist eines der am häufigsten genutzten prokaryotischen Wirtsorganismen für die heterologe Proteinexpression. Die Genetik von E.coli ist sehr viel besser charakterisiert, als die anderer Mikroorganismen.

Wir bieten zwei „Expressionspakete“ an: 

ECOLI-01: 5 mg gereinigtes >95%, lösliches Protein 
ECOLI-02: 15 mg gereinigtes >95%, lösliches Protein

Expressionservice Produktbeschreibung (E.coli) 

Unser E.coli Proteinexpressions-Protokoll besteht, wie dies in der untenstehenden Tabelle zu sehen ist, aus mehreren hintereinander folgenden Arbeits- und Verifizierungsschritten, beginnend mit der Gensynthese bis hin zum gereinigten Protein. Für die Herstellung eines Proteins im E.coli Expressionssystem werden etwa 9 Wochen Zeit benötigt.

Arbeitsschritte (1-4) Zwischenprodukte Durchschnittliche
Bearbeitungszeit (*)
1. Gensynthese
-Codon Optimierung
-Gensynthese
-Klonierung in Standard pUC Plasmid
-Vollständige Sequenzierung
verifiziertes Gen
in pUC Plasmid
1-2 Wochen
2. Subklonierung in Expressionsvektor
-Plasmidpräparation
-Subklonierung in Expressionsvektor
-Klonauswahl
-Vollständige Sequenzierung
verifiziertes Gen
in Expressionvektor
1-2 Wochen
3. Expression im Pilotmaßstab
-Expressionsvektorpräparation
-Transformation von 3 verschiedenen Ansätzen
-Proteininduktion und Optimierung der Bedingungen
- Bestimmung der Ausbeute und Proteineigenschaften
10-50 µg teilgereinigtes
Protein
1-2 Wochen
4. Expression und Proteinreinigung
-Expression in 1 bis 5 l Bakterienkultur
-Proteinextraktion
-Proteinreinigung
-SDS-PAGE, WESTERN Blot
5-20 mg gereinigtes
Protein
Reinheit >95%
2-3 Wochen

(*) Durchschnittliche Bearbeitungszeit und Herstellungsdauer. Die tatsächliche Lieferzeit kann in Abhängigkeit von z.B. DNA-Sequenz, Reinigungsschritten usw. davon abweichen. Wir informieren Sie per E-Mail zeitnah über den aktuellen Stand Ihres Projektes.

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