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Secuenciación de proteínas

Bienvenido a nuestra División Bioanálisis. El servicio de secuenciación de proteínas se indica perfectamente para intentar caracterizar una proteína desconocida (secuenciación de 15 a 20 aa seguida de una investigación en las bases de datos) o solamente para una confirmación (secuenciación de 5 aa). Quedamos a su entera disposición para responder a todas sus preguntas. Secuenciación N- Terminal, técnica de degradación de Edman Hasta 25 aa Informe de análisis con cromatogramas, investigación BLAST

Nuestras ofertas
Secuenciación proteica N-terminal
La técnica de degradación de Edman comprende las etapas sucesivas de (i) derivación del aminoácido del extremo N- Terminal por reacción de la agrupación amina, (ii) separación del aminoácido modificado, (iii) elución por HPLC en fase inversa con detección UV a 270 nm.

La comparación de los tiempos de retención obtenidos con los de una muestra estándar de aminoácidos derivados permite identificar los residuos sucesivos (Fig. 1).

Fig. 1. Perfil de elución HPLC de la mezcla de 19 aminoácidos derivados estándares que permite establecer los tiempos de retención. X indican subproductos de la química del procedimiento de Edman.

Otros Servicios

• Ofrecemos también la secuenciación interna por separación química de la cadena polipeptídica. Sírvase contactarnos con el detalle de su proyecto.

Sus muestras

-Cantidad de proteína: 20 pmoles

- Forma de la muestra

Preferiblemente transferida en membrana PVDF

Después de transferencia sobre membrana a partir de gel 1D o 2D, la coloración debe realizarse al azul de Coomasia (R250). Después de coloración y decoloración, es indispensable realizar un buen lavado con agua desionizada.

Las bandas deben estar concentradas al máximo (15 a 20 pmoles/pozo) y pueden proporcionarnos varias bandas. También pueden proporcionarnos la membrana entera con una fotocopia que indique la banda que les interesa y su peso molecular.

En solución o liofilizado

Tenga en cuenta que todas estas muestras están sometidas a una prepurificación que se factura en suplemento.

30 a 150 µl de solución (H2O, acetonitrilo, propanol...)

Sus muestras no deben contener sales o tampones. Debido a la química utilizada, todo contaminante que contenga una agrupación amina (e.g. Tris) entrará en competición con su proteína en la etapa de derivación y hará el análisis prácticamente imposible.

-Pureza de la muestra

Membrana PVDF: La/las bandas de interés deben ser separadas correctamente.

En solución: La proteína debe ser única, una mezcla daría para cada ciclo múltiples residuos. Tenga en cuenta que las muestras obtenidas por inmuno-precipitación o purificadas por afinidad dan generalmente buenos resultados.

Limitaciones técnicas
• Los péptidos y las proteínas cuyo extremo N- Terminal está bloqueado (e.g. grupo amina con un derivado acetil, formil...) no pueden secuenciarse.

• Las proteínas de alto peso molecular (> 75 kDa) resultan a menudo difíciles de analizar. La razón de ello se debe, casi siempre, a una cantidad/calidad insuficiente de muestra. Para este tipo de proteína la purificación, la separación y la transferencia deben ser objeto de un cuidado particular

• Los aminoácidos substituidos así como el Cis no modificados dan un ciclo denominado blanco (el aminoácido se encuentra en la cadena pero no se detecta).

• La calidad de las muestras es crucial. Toda impureza que pudiera intervenir en las reacciones químicas en juego (en particular las especies que contienen una agrupación amina) harán el análisis impracticable.

Información para realizar un pedido (véase también Condiciones de venta)

Nuestros precios se indican en la página: Tarifas

La tarifa inicial es un precio fijo mínimo que comprende el análisis de los 5 primeros aminoácidos.

Pueden enviarnos su membrana PVDF claramente definida y etiquetada recubierta en un parafilm dentro de un sobre acolchado con su orden de pedido y una carta indicando el número de aminoácidos que deben secuenciarse, así como la descripción de su muestra (fotocopia que muestra la/las bandas, peso molecular, cantidades en pmoles estimadas...).

Si usted desea una búsqueda en las bases de datos, le agradecemos nos indique, la especie origen, la familia de proteínas si se conoce...

Les agradecemos que envíe sus muestras por correo o transporte urgente a la siguiente dirección:

GENOSPHERE BIOTECHNOLOGIES
Analyse Protéine
2 rue des Gravilliers
75003 PARIS
FRANCE

Telf.: 01 42 71 70 21

La recepción le será confirmada por correo electrónico.