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Protein-Sequenzierung

Willkommen zu unserer Bioanalysis Abteilung. Unsere Leistung der "Protein-Sequenzierung" ist für die Kennzeichnung unbekannter Proteine (Sequenzierung von 15 bis 20 aa und Forschung in den Datenbanken) oder für die "Sequenz"-Bestätigung (Sequenzierung ab 5 aa) besonders geeignet. Wir stehen für alle weiteren Informationen zu Ihrer Verfügung. N-Anschluss Sequenzierung, "Edman"-Abbau-Technik Bis zu 25 aa Analyse-Bericht mit Chromatogrammen, und Ergebnisse der BLAST Forschung.

Unsere Angebote
N-Anschluss Protein-Sequenzierung
Die Edman-Abbau-Technik besteht aus den aufeinanderfolgenden Etappen der (i) Derivatisation der N-Anschluss-Aminsäure durch Reaktion seiner Amingruppe, (ii) Isolierung der veränderten Aminsäure, (iii) Eluierung durch HPLC in Rückphase mit UV Abfragung bei 270 nm.

Der Vergleich der Reaktionszeiten mit diesen genäherten Standard-Aminsäuren erlaubt auch Rückstandsreihenfolgen zu kennzeichnen (Bild 1).

Bild 1.  Das HPLC-Eluierungsprofil einer Mischung von 19 genäherten Aminsäuren erlaubt die Zurückhaltenszeiten zu kennzeichnen. Die X zeigen einige Nebenerscheinungen, die während des Edman-Abbauprozesses gebildet werden.

Ihre Proben

- Proteinmenge: 15 bis 20 pmolen

- Probeform
Auf einer PVDF-Membrane bevorzugt übertragen.
Nachdem das Protein vom 1D oder 2D Gelen auf die Membrane übertragen wird, muss es mit Coomassie Blau (R250) gefärbt werden.

Nach Färbung und Abfärbung müssen die befleckten Membranen unbedingt mit entionisiertem Wasser ausgespült werden. Die Streifen sollen soviel wie möglich konzentriert sein (15 bis 25 pmolen pro Well) und Sie können uns mehrere Streifen schicken. Sie können uns auch die vollständige Membrane senden, mit einer Kopie, mit der angezeigten Streife, die Ihr Interesse betrifft, und sein Molekulargewicht.

In Lösung oder lyophilisiert
(Alle Proben benötigen vorgereinigt zu werden, und werden noch dazu berechnet)
30 bis 150 µL der Lösung (H2O, Acetonitril, Propanol ...)

Ihre Proben sollen von Salzen und Puffern frei sein. Aus chemischen Gründen, beachten Sie bitte, dass jeglicher Schadstoff, der eine Aminen-Gruppierung beinhaltet, (z.B. Tris) in Wettbewerb mit Ihrem Protein bei der Derivatisierungsphase tritt, und die Analyse praktisch unmöglich macht.

- Reinheit der Probe
PVDF-Membrane: nach Interesse gut getrennte Streifen

In Lösung: das Protein muss einzig sein, eine Mischung würde für jede Phase mehrere Rückstände geben. Beachten Sie bitte, dass die durch Immunpräzipitation oder durch Affinität gereinigte Proben gute Ergebnisse für die Sequenzierung ergeben.

Technische Beschränkungen
• Peptid und Protein mit blockierten N-Anschluss (z.B. Amingruppen mit einem Derivat Acetyl, Formyl ...) können nicht sequenziert werden.
• Die Proteine mit hohem Molekulargewicht (über 75 kDa) sind oft viel schwieriger zu analysieren. Der Grund dafür ist oft eine zu niedrige Probemenge oder Reinheit. Für dieses besondere Protein müssen die Reinigung, die Trennung und die Befleckung extrem vorsichtig durchgeführt werden.
• Die glycoliserten Überreste der Aminsäuren, sowie die unveränderten Cys geben einen "unbelegten Zyklus" (die Aminsäure wird von der Peptidkette zerspalten, und nicht festgestellt).
• Die Probenqualität ist kritisch. Jene Verunreinigung, die mit den chemischen Reaktionen interferieren kann (besonders die Amin enthaltenen Chemikalien), macht die Analyse unmöglich.

Bestellinformationen (Siehe auch Verkaufsbedingungen)
Unsere Preise stehen auf der Seite: Preisangaben

Die minimale Preisangabe ist eine Pauschale, die die Analyse der 5 ersten Aminsäuren mit einschließt.

Sie können Ihre PVDF-Membrane im Parafilm umgewickelt und in einem Polsterumschlag mit Ihrem Bestellformular und ein Schreiben mit der Anzahl der zu sequenzierenden Aminsäure. Geben Sie bitte die Beschreibung Ihrer Probe (Bild der Streife(n), Molekulargewicht, geschätzte Menge in pmolen ...). Wenn Sie eine Forschung in den Datenbanken wünschen, schreiben Sie uns bitte die Proteindetails (Sorte, vermutete Familie ...).

Senden Sie bitte Ihre Proben per Post oder Kurierdienst zur folgenden Anschrift:

GENOSPHERE BIOTECHNOLOGIES
Abteilung Protein-Sequenzierung
2 rue des Gravilliers
75003 Paris
Frankreich

Tel. : 01 42 71 70 21

Der Empfang wird Ihnen per Email bestätigt.